1. Propiedades de los péptidos

El polipéptido es un compuesto formado al conectar múltiples aminoácidos en secuencia. Los aminoácidos son compuestos anfóteros con las características de los zwitteriones.

2. Factores que afectan la separación de péptidos

Tamaño de poro del relleno de la columna (120 Å, 300 Å)
Aditivos y concentraciones (ácido fórmico, reactivos de par iónico)
pH
Disolvente de elución (acetonitrilo, metanol, isopropanol)
Degradado
Temperatura
Tasa de flujo

El tamaño de los poros se refiere al diámetro de los poros en la bola de sílice. Las moléculas ingresan a los poros y son adsorbidas por los grupos alquilo unidos en los poros para lograr el efecto de separación. El tamaño de los poros es pequeño, la porosidad es alta, el área superficial específica es grande y la carga de carbono es alta. Las moléculas se separan en el poro, el tamaño del poro debe coincidir con el tamaño de la molécula y la molécula debe poder ingresar al poro. En general, se usan 80-120 Å para moléculas pequeñas y 300 Å para moléculas grandes. Para lograr la mejor separación, generalmente se requiere que el diámetro de los poros sea el diámetro de la molécula. 3 veces o más.

El pH bajo reduce la disociación de las cadenas laterales ácidas, los reactivos de apareamiento de iones (como el ácido trifluoroacético) interactúan con las cadenas laterales básicas de las cadenas peptídicas, neutralizan sus propiedades eléctricas y la reducción de la carga mejora la interacción hidrofóbica de los péptidos y la base. cadenas laterales de polipéptidos No hay adsorción con grupos silanol, pero los reactivos de emparejamiento de iones pueden reducir la eficiencia de ionización de la MS.

3. Caso del proyecto

Separación en fase líquida:

Columna: Welch Ultisil® XB-C18 (2,1 × 100 mm, 5 μm 300 Å)

Fase móvil: Gradiente A (0,1 % de ácido trifluoroacético) B (0,1 % de acetonitrilo de ácido fórmico)

Temperatura de la columna: 40 ℃

Detector ultravioleta: 220nm

Caudal: 0,3 ml/min.

Volumen de inyección: 5 μL

Discusión:

El peso molecular del compuesto peptídico es de aproximadamente 2000. Los diámetros de poro de 120 Å y 300 Å se pueden seleccionar para lograr una retención eficaz. Durante el experimento, se encontró que la forma del pico de 120 Å era mala. El análisis puede ser que el volumen molecular de la sustancia en este sistema es grande, por lo que la columna de 300 Å La forma del pico superior se ha mejorado significativamente. Se puede ver que el peso molecular se puede utilizar como referencia para seleccionar el tamaño de poro del relleno, pero no es absoluto. Al hacer péptidos, se recomienda probar tanto la columna cromatográfica convencional de tamaño de poro de 120 Å como la columna cromatográfica de tamaño de poro grande de 300 Å para elegir un tamaño de poro más adecuado;

Cuando se usa ácido fórmico como aditivo en la fase móvil, no hay retención. Cuando se selecciona ácido trifluoroacético con efecto de emparejamiento de iones, la retención es buena. Este sistema es el sistema convencional de elección cuando se detectan péptidos y luego se ajusta de acuerdo con los resultados de este sistema.