1. Propiedades de los péptidos

El polipéptido es un compuesto formado al conectar múltiples aminoácidos en secuencia. Los aminoácidos son compuestos anfóteros con características de zwitteriones.

2. Factores que afectan la separación de péptidos

Tamaño de los poros del relleno de la columna (120 Å, 300 Å)
Aditivos y concentraciones (ácido fórmico, reactivos de pares iónicos)
pH
Disolvente de elución (acetonitrilo, metanol, isopropanol)
Gradiente
Temperatura
Caudal

El tamaño de los poros se refiere al diámetro de los poros de la bola de sílice. Las moléculas entran en los poros y son adsorbidas por los grupos alquilo unidos en los poros para lograr el efecto de separación. El tamaño de los poros es pequeño, la porosidad es alta, el área de superficie específica es grande y la carga de carbono es alta. Las moléculas se separan en el poro, el tamaño del poro debe coincidir con el tamaño de la molécula y la molécula debe poder entrar en el poro. Generalmente, se utilizan 80-120 Å para moléculas pequeñas y 300 Å para moléculas grandes. Para lograr la mejor separación, generalmente se requiere que el diámetro de los poros sea el diámetro de la molécula. 3 veces o más.

El pH bajo reduce la disociación de las cadenas laterales ácidas, los reactivos de apareamiento iónico (como el ácido trifluoroacético) interactúan con las cadenas laterales básicas de las cadenas peptídicas, neutralizan sus propiedades eléctricas y la reducción de la carga mejora la interacción hidrofóbica de los péptidos y la básica. cadenas laterales de polipéptidos No hay adsorción con grupos silanol, pero los reactivos de apareamiento iónico pueden reducir la eficiencia de ionización de MS.

3. Caso del proyecto

Separación en fase líquida:

Columna: Welch Ultisil® XB-C18 (2,1×100 mm, 5 μm 300 Å)

Fase móvil: Gradiente A (ácido trifluoroacético al 0,1%) B (acetonitrilo del ácido fórmico al 0,1%)

Temperatura de la columna: 40 ℃

Detector UV: 220 nm

Caudal: 0,3 ml/min.

Volumen de inyección: 5 μL

Discusión:

El peso molecular del compuesto peptídico es de aproximadamente 2000. Se pueden seleccionar diámetros de poro de 120 Å y 300 Å para lograr una retención eficaz. Durante el experimento, se descubrió que la forma del pico de 120 Å era deficiente. El análisis puede ser que el volumen molecular de la sustancia en este sistema sea grande, por lo que la forma del pico superior de la columna de 300 Å se ha mejorado significativamente. Se puede observar que el peso molecular se puede utilizar como referencia para seleccionar el tamaño de poro del relleno, pero no es absoluto. Al preparar péptidos, se recomienda probar tanto la columna cromatográfica de tamaño de poro convencional de 120 Å como la columna cromatográfica de tamaño de poro grande de 300 Å para elegir un tamaño de poro más adecuado;

Cuando se utiliza ácido fórmico como aditivo en la fase móvil, no hay retención. Cuando se selecciona ácido trifluoroacético con efecto de apareamiento iónico, la retención es buena. Este sistema es el sistema convencional de elección a la hora de detectar péptidos y luego ajustarlo según los resultados de este sistema.