La elución en la cromatografía de intercambio iónico se puede lograr mediante gradientes de sal lineales o escalonados. Por lo general, es mejor comenzar con un gradiente de sal lineal y mantener el gradiente durante unos 10 volúmenes de columna. La operación de gradiente requiere dos tampones, un tampón de equilibrio (tampón A) y un tampón para cargar iones de carga opuesta (tampón B). En la mayoría de los casos, la segunda mitad del gradiente no es necesaria porque la mayoría de las proteínas se pueden eluir de los intercambiadores de iones convencionales a concentraciones de sal de 150-500 nmol/L. Por lo tanto, normalmente una pendiente máxima del 50 % es suficiente.

La elución por etapas también se puede aplicar en los tampones A y B. Pero los tiempos de retención a menudo se ven afectados por la retención de sal y el volumen muerto en HPLC. Además, debido a las características de elución del tampón mezclador, solo se puede obtener una curva sigmoidea. Por lo tanto, no se obtiene un proceso de elución por etapas ideal adecuado para columnas de cromatografía. Dependiendo de la concentración de sal elegida en el paso de elución, la proteína se moverá o se moverá detrás del pico de sal. Yamamoto et al la denominaron elución tipo I o tipo II. Después de lavar el eluato concentrado, la concentración de sal elegida debe ser adecuada para la elución de Tipo I. La concentración de sal en este momento puede ser algo mayor que la concentración de sal máxima alcanzada con la elución de gradiente lineal correspondiente. La elución de tipo I requiere menos de 1 volumen de columna de tampón.

La elución del gradiente de pH es más difícil de optimizar. Por lo tanto, es mejor encontrar primero una condición basada en el pI de la proteína, cuando la proteína no está unida al intercambiador de iones. Si es menor que pI, se debe usar un intercambiador de aniones, y si es mayor que pI, se debe usar un intercambiador de cationes. Por lo tanto, el pH debe reducirse o aumentarse. El propio intercambiador de iones actúa como un ácido o una base, y el gradiente de pH resultante sigue una curva de titulación. Es muy difícil obtener un gradiente de pH lineal, pero se puede lograr con tampones de borato que contienen glicoles como el manitol. Cuando se eluye con un tampón de menor concentración de 10 mmol/L, el gradiente de pH inducido por la aplicación de sal puede mejorar la resolución y también es beneficioso para la concentración de los picos de proteína. En este caso, también se requieren varios volúmenes de columna de tampón.

Medios de cromatografía de intercambio iónico de Welch Materials

Q /ESP/DEAE/CM Medios de intercambio iónico de matriz de agarosa de flujo rápido Tanrose FF

Q/SP Tanrosa HP Medio de intercambio iónico de matriz de agarosa de alta resolución

Q/SP Tanrose XL Medio de intercambio iónico de matriz de agarosa de alta capacidad

Q/SP Tanrose BB Medio de intercambio iónico de matriz de agarosa de partículas grandes

Tándex DEAE/CM Medios de intercambio iónico de matriz de dextrano