En el trabajo de desarrollo de métodos, a menudo se encuentra que el método no se puede reproducir durante la validación y, en este momento, muchas personas atribuirán el "incorrecto" a la columna. De hecho, hay muy pocos elementos "hipersensible" que sean extremadamente sensibles al entorno interno de la columna cromatográfica y no puedan reproducirse. Pero la mayor parte de la imposibilidad de reproducirse se debe a otras razones. Hoy hablaremos de estas otras razones.

Cambios de columna durante el uso, comúnmente conocidos como modificación de columna

Este problema ocurre a menudo cuando el método se desarrolla utilizando una columna cromatográfica que ha sido probada para otros elementos y luego se reemplaza la columna cromatográfica para su reproducción. Esto se debe a que algunas sustancias especiales (pueden ser trazas de impurezas o sustancias de fuerte retención en la muestra) se adsorberán en los materiales de empaque y no se podrán eluir, lo que provocará modificaciones en la columna cromatográfica. Al detectar algunos componentes específicos, la capacidad de retención de los componentes se verá afectada, lo que resultará en la imposibilidad de reproducir el efecto de separación después de reemplazar la columna cromatográfica. La mejor manera de evitar esto es reproducir los resultados con una nueva columna tan pronto como se establezca el método. Si la nueva columna no reproduce los resultados, existe una alta posibilidad de que la columna anterior haya sido modificada.
En ocasiones, el desarrollo del método se lleva a cabo utilizando una columna cromatográfica que no ha sido probada para otros elementos. Cuando el método se reproduzca más adelante, también sucederá que la sustitución de la columna no se podrá reproducir. Esto se debe a que en el proceso de desarrollo del método se utilizan muchas muestras con diferentes condiciones y diferentes métodos de pretratamiento, lo que también puede modificar la columna cromatográfica. Por lo tanto, incluso si el método se desarrolla con una columna que no se ha utilizado en otros proyectos, una vez determinado el método, es necesario reproducirlo con una columna nueva.
Las condiciones extremas de la columna cromatográfica (como un valor de pH alto, una temperatura alta, un valor de pH bajo, etc.) provocan daños en la columna cromatográfica. El método desarrollado en esta columna cromatográfica a menudo no se reproduce cuando se reemplaza la nueva columna. Caso. Un pH alto hará que el gel de sílice se disuelva y la columna colapse. Un pH bajo hará que la fase unida se caiga fácilmente y una temperatura alta hará que los materiales de empaque colapsen y se endurezcan, lo que cambiará la capacidad de retención de la columna cromatográfica. Por lo tanto, el método que utiliza esta condición debe reproducirse con una nueva columna cromatográfica una vez determinado el método.
La columna cromatográfica se ha utilizado con reactivos de apareamiento iónico. Los reactivos de emparejamiento iónico modificarán la columna cromatográfica y no se pueden enjuagar por completo. Por lo tanto, se recomienda que la columna cromatográfica que ha utilizado reactivos de apareamiento iónico se dedique a la columna.

Las razones específicas, ¡continuaremos respondiéndolas en el próximo artículo! Continuará ~