El llamado método de la farmacopea, como su nombre lo indica, es el método contenido en la monografía de la farmacopea. En el proceso de análisis cromatográfico y desarrollo de métodos con referencia al método de la Farmacopea, debido a las diferentes condiciones de laboratorio, es imposible realizar un análisis confiable de acuerdo con el método de la Farmacopea. Debemos entender que el método de la farmacopea tiene un cierto rango ajustable considerando las diferencias de cada laboratorio.

¡Discutamos este tema en detalle!

Reglamento de la Farmacopea China 2020

0512 Cromatografía líquida de alta resolución se especifica de la siguiente manera:

Las condiciones cromatográficas (parámetros) especificadas en el texto de la categoría no deben cambiarse, excepto el tipo de relleno, los componentes de la fase móvil y el tipo de detector, la temperatura de la columna, el volumen de inyección, la sensibilidad del detector, etc., que se pueden cambiar adecuadamente para cumplir con los requisitos de la prueba de idoneidad del sistema.

Al ajustar la proporción de componentes de la fase móvil:

Cuando el porcentaje X del componente de pequeña proporción es inferior al 33%, el rango de cambio permitido es 0,7X~1,3X.

Cuando X es mayor que 33%, el rango de cambio permitido es X-10%~X 10%.

De lo anterior se puede ver que el método de monografía de la Farmacopea China no debe cambiarse excepto el tipo de relleno, los componentes de la fase móvil (la proporción se ajusta dentro del rango especificado) y el tipo de detector, y otras condiciones han cambiado. y todavía se considera un método de farmacopea.

Sin embargo, la Farmacopea China no estipula la validación del método. Por lo tanto, incluso para los métodos de la Farmacopea China, se debe realizar un conjunto completo de validación de métodos de acuerdo con las disposiciones pertinentes para la validación de métodos analíticos.

Regulaciones de la farmacopea de EE. UU.

USP43(621) CROMATOGRAFÍA especifica lo siguiente:

Se permiten condiciones de operación ajustadas para cumplir con los requisitos de idoneidad del sistema, a menos que se especifique lo contrario en la monografía. El siguiente es el rango máximo ajustable que se enumera y se debe realizar un conjunto completo de validación de métodos de acuerdo con las disposiciones pertinentes para la validación de métodos analíticos. El ajuste de múltiples condiciones tendrá un impacto acumulativo en el rendimiento del sistema, que debe considerarse cuidadosamente antes de la implementación.

El pH del tampón de fase móvil (HPLC): ajustar dentro de ±0,2 unidades o dentro del rango especificado, adecuado para gradiente e isocrático.
Concentración de sal tampón de fase móvil (HPLC): ±10 % (el pH lo permite), adecuada para gradiente e isocrática.
La proporción de componentes en la fase móvil (HPLC): los componentes con una proporción de componentes de ≤50 % se pueden ajustar en ±30 %, pero el ajuste de cualquier proporción de componentes no debe exceder el ±10 % (en relación con la fase móvil total) , el ajuste de la fase móvil que contiene tres componentes se puede realizar en grupos, y el ajuste de la fase móvil que contiene dos componentes se puede realizar en el componente más pequeño.

Ejemplo de ajuste de dos componentes: como la fase móvil 50:50, el 30% del 50% de un componente es 15%, pero excede la regulación de ±10% de la proporción total, por lo que el rango de ajuste de esta relación de fase móvil debe ser ± Está limitado al 10% y se puede ajustar dentro del rango de 40:60~60:40. Para otro ejemplo, la relación de fase móvil es 2:98, en la que el 30% del 2% del componente pequeño es el 0,6%. Este valor no supera la regulación de ±10% de la proporción total. La relación de esta fase móvil no puede ser superior a 1,4:98,6~2,6: Ajustable entre el rango de 97,4.

Ejemplo de ajuste de tres componentes: fase móvil 60:35:5, el 30% de su subcomponente 35% es 10,5%, pero excede la regulación de ±10% de la proporción total, por lo que el subgrupo en este ratio de fase móvil es 10,5% . El rango de ajuste de los puntos debe limitarse a ±10%. 30% para el componente mínimo 5% es 1,5%. Se puede ajustar dentro del rango de no más de 50:45:5~70:25:5 o 58.5:35:6.5~61.5:35:3.5.

Longitud de onda del detector ultravioleta (HPLC): No se permite cambiar la longitud de onda de detección especificada en la monografía. El programa del proveedor del detector u otro programa de verificación indica que el error de detección de longitud de onda no debe exceder ±3 nm como máximo.
Fase estacionaria:
Longitud de la columna (GC): Ajustable dentro de ±70%.
Longitud de columna (HPLC): consulte Tamaño de partícula.
ID de columna (HPLC): se puede ajustar si la velocidad lineal se mantiene constante. Consulte el caudal de HPLC.
Diámetro interior de la columna (GC): Ajustable hasta ±50%.
Espesor de la película (columna capilar GC): Ajustable desde −50% hasta 100% como máximo.
Tamaño de partícula (HPLC): elución isocrática: tanto el tamaño de partícula como la longitud de la columna se pueden modificar, pero la relación (L/dp) entre la longitud de la columna (L) y el tamaño de partícula (dp) es constante o se especifica en la longitud de la columna y el tamaño de partícula. . dentro del rango de -25%~ 50% de la relación. Alternativamente (para el ajuste del tamaño de partícula aplicado a partículas superficialmente porosas), se pueden usar columnas de otra longitud de columna (L) y tamaño de partícula (dp), pero el número de platos teóricos (N) debe estar entre -25 % y 50 % de la columna especificada dentro del rango. Se debe tener precaución si el ajuste da como resultado un mayor número de placas teóricas, lo que resultará en volúmenes de pico más pequeños, y se debe ajustar reduciendo factores para un ensanchamiento adicional de picos extra-columna, como el tubo del instrumento, el volumen de la celda de detección y la frecuencia de muestreo. e introduzca el volumen de muestra. Cuando el tamaño de partícula no se especifica en la monografía, la relación se calculará utilizando el tamaño máximo de partícula de la columna especificada.

Tamaño de partícula (GC): el tamaño de partícula se puede cambiar de grande a pequeña o de pequeña a grande si el cromatograma cumple con los requisitos de idoneidad del sistema y la relación del rango de tamaño de partícula es la misma, definida como el diámetro de tamaño de partícula más grande dividido por el más pequeño. diámetro del tamaño de partícula.

Caudal (GC): el caudal se puede ajustar hasta ±50 %.

Caudal (HPLC): Cuando se cambia el tamaño de las partículas, es posible que sea necesario ajustar el caudal, porque para lograr el mismo rendimiento, la columna de tamaño de partículas pequeñas requiere una mayor velocidad lineal (medida a través de una menor altura del plato), caudal, columna. ID, tamaño de partícula mediante la siguiente conversión de fórmula.

F2=F1×[（dc22×dp1）/（dc12×dp2）]

F1	= caudal especificado en la monografía
F2	= caudal ajustado
dc1	= diámetro interior de la columna especificado en la monografía
dc2	= diámetro interior de la columna utilizada
dp1	= tamaño de partícula de la columna especificado en la monografía
dp2	= tamaño de columna para un uso fácil

Para la elución isocrática, si el tamaño de partícula cambia de ≥3μm a <3μm, la velocidad lineal aumentará (ajustando el caudal) para que la eficiencia de la columna no caiga más del 20%, de manera similar, si el tamaño de partícula cambia. de <3 μm a ≥3 μm, la velocidad lineal (caudal) debe reducirse para evitar una reducción en la eficiencia de la columna de más del 20 %. Durante la elución en gradiente, no se permitirá ajustar el caudal, el diámetro de la columna ni el tamaño de las partículas. Además, el caudal se puede ajustar a ±50% (solo para elución isocrática).