Es muy importante mantener un pH constante durante el intercambio iónico. Como se discutió anteriormente, los cambios en el pH pueden causar cambios en la cantidad y distribución de las cargas de proteínas, lo que afecta directamente si la proteína puede unirse al intercambiador y la capacidad de unión. fortaleza. Por lo tanto, deben usarse tampones para la fase móvil en la cromatografía de intercambio iónico.

Hay muchos tipos de tampones, y las sustancias que pueden actuar como tampones se pueden dividir en dos categorías: la primera categoría es un sistema compuesto por ácidos débiles (o bases débiles) y las sales correspondientes. La segunda categoría son los compuestos zwitteriónicos. Para el primer tipo de sustancias amortiguadoras, durante el intercambio iónico, si la carga del ion amortiguador es opuesta al grupo funcional en el intercambiador iónico, participará en el proceso de intercambio iónico y puede afectar el pH local, por lo que debe usarse cuanto más se pueda. Iones tampón con la misma carga que el grupo funcional, es decir, cuando utilice un intercambiador de aniones, elija un ión tampón con carga positiva, y cuando use un intercambiador catiónico, elija un ión tampón con carga negativa.

Por supuesto, esto no es absoluto. Por ejemplo, el tampón de fosfato se usa a menudo en el proceso de intercambio de aniones, pero en este caso, se debe prestar especial atención al equilibrio completo antes de cargar la muestra para garantizar que el pH y la fuerza iónica del sistema cromatográfico sean consistentes con el valor inicial. Los tampones son los mismos. El segundo tipo de sustancias amortiguadoras se puede utilizar tanto en el intercambio aniónico como catiónico. Los tampones comúnmente utilizados para la cromatografía de intercambio catiónico y la cromatografía de intercambio aniónico se enumeran en las Tablas 1 y 2, respectivamente.

Tabla 1 Tampones de uso común para la cromatografía de intercambio catiónico

Aunque se pueden eliminar muchas proteínas de impurezas durante el proceso de intercambio iónico para lograr el efecto de purificación, el pico de elución de la proteína objetivo debe contener una gran cantidad de sustancias tampón y componentes de sal, y la introducción de estos componentes también es una impureza para la proteína objetivo. sí mismo. Especialmente cuando los picos de elución deben liofilizarse después de la cromatografía para obtener muestras de proteínas puras, la mayoría de los polvos después de la liofilización son sustancias tampón y sales. Si se realiza la desalinización o la diálisis antes de la liofilización, aunque estas impurezas se pueden eliminar básicamente, también se puede reducir la tasa de recuperación de la actividad proteica. En este momento, se debe dar prioridad al uso de sustancias tampón volátiles, para que esta parte de las impurezas pueda eliminarse durante la etapa de liofilización. Las sustancias tampón volátiles comunes se enumeran en la Tabla 3.

Tabla 2 Tampones de uso común para la cromatografía de intercambio de aniones

Tabla 3 Sistemas tampón volátiles

Materiales de embalaje para cromatografía de intercambio iónico de Welch Materials

◌ Q /ESP/DEAE/CM Tanrose FF

Medios de intercambio iónico de matriz de agarosa de flujo rápido

◌ Q/SP Tanrosa HP

Medios de intercambio iónico de matriz de agarosa de alta resolución

◌ Q/SP Tanrose XL

Medios de intercambio iónico basados ​​en agarosa de alta capacidad

◌ Q/SP Tanrose BB

Medio de intercambio iónico de matriz de agarosa de partículas grandes

◌ Tándex DEAE/CM

Medios de intercambio iónico de matriz de dextrano