Como todos sabemos, el análisis cualitativo cromatográfico consiste en determinar los compuestos representados por cada pico cromatográfico. Dado que diversas sustancias tienen valores de retención definidos en determinadas condiciones cromatográficas, los valores de retención pueden utilizarse como indicador cualitativo. Varios métodos cromatográficos cualitativos se basan en valores de retención. Sin embargo, diferentes sustancias pueden tener valores de retención similares o idénticos bajo las mismas condiciones cromatográficas, es decir, los valores de retención no son excluyentes. Por lo tanto, es difícil caracterizar una muestra completamente desconocida basándose únicamente en los valores de retención. Si realiza un juicio preliminar sobre la composición de la muestra basándose en la comprensión de la fuente, la naturaleza y el propósito del análisis de la muestra, y luego combina los siguientes métodos, puede determinar los compuestos representados por los picos cromatográficos.

Existen varios métodos cualitativos en cromatografía. Hoy compartiré brevemente varios métodos cualitativos comúnmente utilizados en cromatografía.

Muestra estándar cualitativa

El uso de muestras estándar para caracterizar compuestos desconocidos es un método cualitativo de HPLC comúnmente utilizado. Dado que cada compuesto tiene un valor de retención característico en condiciones cromatográficas específicas (composición de la fase móvil, columna cromatográfica y temperatura de la columna, etc.), el valor de retención se puede utilizar para la caracterización. Si los valores de retención del compuesto probado y la muestra estándar son consistentes bajo las mismas condiciones cromatográficas, se puede considerar preliminarmente que el compuesto probado es el mismo que la muestra estándar. Si el valor de retención del compuesto probado aún es consistente con el valor de retención de la muestra estándar después de cambiar la composición de la fase móvil muchas veces, se puede confirmar aún más que el compuesto probado y la muestra estándar son el mismo compuesto.

Caracterización de la función de escaneo de longitud de onda completa del detector UV.

Los detectores UV son los detectores más utilizados en cromatografía líquida de alta resolución. Un detector UV de barrido de longitud de onda completa puede proporcionar información cualitativa valiosa basada en el espectro UV del compuesto detectado. El método tradicional es que cuando el pico cromatográfico de un determinado componente en el cromatograma tiene un valor máximo, es decir, cuando la concentración es máxima, el componente se retiene en la celda de detección mediante la parada de la bomba, y luego los componentes en la celda de detección se someten a un análisis de longitud de onda completo. Escanee para obtener el espectro UV-Vis del componente y luego tome posibles muestras estándar y procéselas de la misma manera. La comparación de los dos espectros puede identificar si el componente es el mismo que la muestra estándar. Determinados compuestos con espectros UV específicos también pueden identificarse comparándolos con espectros estándar.

Caracterización selectiva de detectores.

La respuesta del mismo detector a diferentes tipos de compuestos es diferente, y la respuesta de diferentes detectores al mismo compuesto también es diferente. Por lo tanto, cuando un compuesto de prueba es detectado por dos o más detectores al mismo tiempo, la relación de la sensibilidad de detección de los dos detectores o varios detectores con respecto al compuesto de prueba está estrechamente relacionada con las propiedades del compuesto de prueba, que puede usarse. para detectar Se identificaron los compuestos probados. Éste es el fundamento de la caracterización de detectores duales.

La conexión del sistema de detector dual incluye conexión en serie y conexión en paralelo. Cuando uno de los dos detectores no es destructivo, se puede utilizar una conexión en serie simple conectando el detector no destructivo en serie antes que el detector destructivo. Si ambos detectores son destructivos, deben conectarse en paralelo conectando una T en el extremo de salida de la columna cromatográfica y conectándolos a los dos detectores respectivamente. Los sistemas de detección dual más utilizados para el análisis cualitativo en HPLC son el detector ultravioleta (UVD) y el detector de fluorescencia (FLD).

Análisis cualitativo fuera de línea

Si se utiliza el modo semipreparativo o preparativo, se puede recolectar una fracción de la muestra líquida del efluente de HPLC para poder recolectar una cierta cantidad de analito puro para experimentos de determinación de estructura fuera de línea. Debido a la gran cantidad de muestra disponible, las limitaciones de tiempo del análisis en línea no existen y el análisis estructural fuera de línea a menudo puede proporcionar información estructural concluyente para un pico cromatográfico recolectado. El análisis fuera de línea incluye métodos de análisis tradicionales como FTR, NMR y espectrometría de masas. Siempre que haya suficientes muestras, también podemos utilizar pruebas químicas húmedas, cristalografía de rayos X u otras técnicas analíticas para el análisis de muestras fuera de línea.