Como todos sabemos, el análisis cualitativo cromatográfico consiste en determinar los compuestos representados por cada pico cromatográfico. Dado que varias sustancias tienen valores de retención definidos bajo ciertas condiciones cromatográficas, los valores de retención pueden usarse como un indicador cualitativo. Varios métodos cualitativos cromatográficos se basan en valores de retención. Sin embargo, diferentes sustancias pueden tener valores de retención similares o idénticos bajo las mismas condiciones cromatográficas, es decir, los valores de retención no son excluyentes. Por lo tanto, es difícil caracterizar una muestra completamente desconocida basándose únicamente en los valores de retención. Si realiza un juicio preliminar sobre la composición de la muestra sobre la base de la comprensión de la fuente, la naturaleza y el propósito del análisis de la muestra y luego combina los siguientes métodos, puede determinar los compuestos representados por los picos cromatográficos.

Hay varios métodos cualitativos en cromatografía. Hoy, compartiré brevemente varios métodos cualitativos comúnmente utilizados en cromatografía.

Muestra estándar cualitativa

El uso de muestras estándar para caracterizar compuestos desconocidos es un método cualitativo de HPLC comúnmente utilizado. Dado que cada compuesto tiene un valor de retención característico en condiciones cromatográficas específicas (composición de la fase móvil, columna cromatográfica y temperatura de la columna, etc.), el valor de retención se puede utilizar para la caracterización. Si los valores de retención del compuesto probado y la muestra estándar son consistentes bajo las mismas condiciones cromatográficas, se puede considerar preliminarmente que el compuesto probado es el mismo que la muestra estándar. Si el valor de retención del compuesto analizado aún es consistente con el valor de retención de la muestra estándar después de cambiar la composición de la fase móvil varias veces, se puede confirmar que el compuesto analizado y la muestra estándar son el mismo compuesto.

Caracterización de la función de escaneo de longitud de onda completa del detector UV

Los detectores UV son los detectores más utilizados en cromatografía líquida de alta resolución. Un detector UV de barrido de longitud de onda completa puede proporcionar información cualitativa valiosa basada en el espectro UV del compuesto detectado. El método tradicional es que cuando el pico cromatográfico de un determinado componente en el cromatograma tiene un valor máximo, es decir cuando la concentración es la mayor, el componente es retenido en la celda de detección mediante el paro de la bomba, y luego los componentes en la celda de detección se someten a un análisis de longitud de onda completa. Escanee para obtener el espectro UV-Vis del componente, y luego tome posibles muestras estándar y procéselas de la misma manera. La comparación de los dos espectros puede identificar si el componente es el mismo que la muestra estándar. Ciertos compuestos con espectros UV específicos también se pueden identificar por comparación con espectros estándar.

Caracterización selectiva de detectores

La respuesta del mismo detector a diferentes tipos de compuestos es diferente, y la respuesta de diferentes detectores al mismo compuesto también es diferente. Por lo tanto, cuando dos o más detectores detectan un compuesto de prueba al mismo tiempo, la relación entre la sensibilidad de detección de los dos detectores o varios detectores y el compuesto de prueba está estrechamente relacionada con las propiedades del compuesto de prueba, que se puede utilizar. para detectar Se identificaron los compuestos probados. Esta es la razón fundamental para la caracterización de detectores duales.

La conexión del sistema de doble detector incluye conexión en serie y conexión en paralelo. Cuando uno de los dos detectores no es destructivo, se puede usar una conexión en serie simple conectando el detector no destructivo en serie antes del detector destructivo. Si ambos detectores son destructivos, deben conectarse en paralelo conectando una T en el extremo de salida de la columna cromatográfica y conectándolos a los dos detectores respectivamente. Los sistemas de detección dual más utilizados para el análisis cualitativo en HPLC son el detector ultravioleta (UVD) y el detector de fluorescencia (FLD).

Análisis Offline Cualitativo

Si se utiliza el modo semipreparativo o preparativo, se puede recolectar una fracción de la muestra líquida del efluente de HPLC para que se pueda recolectar una cierta cantidad de analito puro para experimentos de determinación de estructura fuera de línea. Debido a la gran cantidad de muestra disponible, las limitaciones de tiempo del análisis en línea no existen, y el análisis estructural fuera de línea a menudo puede proporcionar información estructural concluyente para un pico cromatográfico recopilado. El análisis fuera de línea incluye métodos de análisis tradicionales como FTR, NMR y espectrometría de masas. Siempre que haya suficientes muestras, también podemos utilizar pruebas de química húmeda, cristalografía de rayos X u otras técnicas analíticas para el análisis de muestras fuera de línea.