La cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) es una herramienta muy valiosa en la tecnología de purificación de proteínas. Una vez que la proteína se une al medio, se debe eluir y recolectar para obtener la proteína objetivo. En la mayoría de los casos, el proceso de elución separa o elimina las impurezas proteicas de la proteína objetivo. A veces, es posible que las impurezas de las proteínas no se unan tan estrechamente al medio y, por lo tanto, eluyan antes que la proteína objetivo. Sin embargo, cuando los multímeros de proteínas se separan mediante cromatografía hidrófoba (HIC), la unión de los multímeros de proteínas objetivo al relleno es más estrecha que la de los monómeros al relleno, y la proteína objetivo aún se unirá al relleno después de la elución. Durante la elución, el efluente puede contener un producto de alta pureza o puede contener importantes impurezas proteicas. Por lo tanto, cuando se utiliza HIC para la separación y purificación, para obtener un producto de pureza adecuada, el efluente debe recogerse en alícuotas durante la etapa de elución. El proceso de elución (elución en gradiente) se muestra en la figura.

Diagrama esquemático de elución en gradiente durante la separación HIC de mezclas de proteínas.

El proceso de elución se puede llevar a cabo de forma isocrática o en gradiente. Los 4 métodos más comunes para la elución de proteínas unidas son los siguientes:

1. Reducir la concentración de sal (en relación con las condiciones de unión)
   La disminución de la concentración de sal debilita correspondientemente la interacción hidrófoba entre la proteína y el ligando, y la proteína se desorbe y eluye de la columna.
2. Añadir disolvente orgánico
   La adición de disolventes orgánicos como etilenglicol o propilenglicol puede alterar la polaridad de la solución, lo que puede interferir con las interacciones hidrofóbicas.
3. Proporcionar concentración de sal (usando sal caotrópica)
   La adición de sales caotrópicas puede interferir con las interacciones hidrofóbicas.
4. Añadir detergente
   Los detergentes se pueden utilizar como desplazadores de proteínas, principalmente para la purificación HIC de proteínas de membrana.

En los pasos de elución descritos anteriormente, el método más común para eluir proteínas de los medios HIC es reducir la concentración de sal. Este método también se utiliza primero cuando se utiliza HIC para purificar nuevas fracciones de proteínas. La desventaja de otros métodos es que se necesitan sustancias adicionales que pueden afectar a la estabilidad de la proteína. Sin embargo, estos reactivos todavía son necesarios para eluir proteínas que están más estrechamente unidas al medio.

Los siguientes rellenos HIC están disponibles en Welch Materials: