La cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) es una herramienta muy valiosa en la tecnología de purificación de proteínas. Una vez que la proteína se une al medio, se debe eluir y recolectar para obtener la proteína objetivo. En la mayoría de los casos, el proceso de elución separa o elimina las impurezas de proteína de la proteína objetivo. A veces, es posible que las impurezas de proteínas no se unan con tanta fuerza al medio y, por lo tanto, eluyan antes que la proteína objetivo. Sin embargo, cuando los multímeros de proteínas se separan mediante cromatografía hidrofóbica (HIC), la unión de los multímeros de proteínas diana al relleno es más estrecha que la de los monómeros al relleno, y la proteína diana aún se unirá al relleno después de la elución. Durante la elución, el efluente puede contener un producto de alta pureza o puede contener importantes impurezas de proteínas. Por lo tanto, cuando se utiliza HIC para la separación y purificación, a fin de obtener un producto de la pureza adecuada, el efluente debe recolectarse en alícuotas durante el paso de elución. El proceso de elución (elución en gradiente) se muestra en la figura.

Diagrama esquemático de gradiente de elución durante la separación HIC de mezclas de proteínas

El proceso de elución se puede realizar de forma isocrática o en gradiente. Los 4 métodos más comunes para la elución de proteínas unidas son los siguientes:

1. Reducir la concentración de sal (en relación con las condiciones de unión)
   La disminución de la concentración de sal debilita correspondientemente la interacción hidrófoba entre la proteína y el ligando, y la proteína se desorbe y eluye de la columna.
2. Añadir disolvente orgánico
   La adición de solventes orgánicos como etileno o propilenglicol puede alterar la polaridad de la solución, lo que puede interferir con las interacciones hidrofóbicas.
3. Proporcionar concentración de sal (usando sal caotrópica)
   La adición de sales caotrópicas puede interferir con las interacciones hidrofóbicas.
4. Agregar detergente
   Los detergentes se pueden utilizar como desplazadores de proteínas, principalmente para la purificación HIC de proteínas de membrana.

En los pasos de elución descritos anteriormente, el método más común para eluir proteínas de medios HIC es reducir la concentración de sal. Este método también se usa primero cuando se usa HIC para purificar nuevas fracciones de proteínas. La desventaja de otros métodos es que se requieren sustancias adicionales, lo que puede afectar la estabilidad de la proteína. Sin embargo, estos reactivos aún son necesarios para eluir las proteínas que están más unidas al medio.

Los siguientes rellenos HIC están disponibles en Welch Materials: