El uso de una fase móvil acuosa es un paso clave en el análisis y la detección de compuestos iónicos mediante cromatografía de fase inversa: incluye el efecto del pH en la retención del analito, el tipo y la concentración de las sales tampón, la solubilidad de las sales tampón en disolventes orgánicos y sus efectos sobre la retención de analitos. efectos de detección, etc. La selección incorrecta de los tipos de sales tampón, la fuerza iónica y los valores de pH pueden dar como resultado una retención deficiente o no reproducible y colas en las separaciones de fase inversa de compuestos polares e ionizables.

El analito estaba parcialmente ionizado, la fuerte interacción entre el analito y los grupos silanol libres y otros sitios activos de la fase estacionaria, etc., puede resolverse seleccionando el rango de tampón apropiado, el tipo correcto de sal tampón y su concentración (fuerza iónica ) mejorar. Análisis LC-MS sensible con mayor énfasis en la elección de ácidos, bases, tipos de sales tampón y otros aditivos: Los tampones no inhiben la ionización de los analitos.

En el modo de fase inversa, la retención de compuestos iónicos está determinada principalmente por el pH de la fase móvil. Las propiedades de disociación de los grupos funcionales iónicos también afectan la retención de compuestos. La retención de compuestos no iónicos apenas se ve afectada por el pH de la fase móvil. Para los compuestos que contienen grupos ácidos (principalmente carboxilatos), un valor de pH inferior al pKa del compuesto puede mejorar la retención, y para los compuestos que contienen grupos básicos (principalmente aminas), un valor de pH superior al pKa del compuesto puede mejorar la retención.

Los cambios de pH más pequeños tienen poco efecto sobre la proporción de especies aprotón-próticas a valores de pH más alejados del pka. Por lo tanto, los cambios moderados de pH no tienen un efecto significativo sobre la retención. Pequeños cambios en el pH alrededor del pKa pueden tener un efecto notable en la proporción de las dos especies. Por lo tanto, cambiar el pH cerca del pKa puede afectar significativamente la retención del compuesto. Cuando se usa el pH como un medio para aumentar la retención del compuesto, la consideración debe ser minimizar la ionización del analito. Un tampón es una solución de un ácido débil y su base conjugada, o de una base débil y su ácido conjugado.

Los tampones reducen la influencia de los iones de hidrógeno, los iones de hidronio y los iones de hidróxido, lo que da como resultado menos fluctuaciones de pH, incluida la dilución. En el modo de fase inversa, el rango de tolerancia de pH de los materiales de empaque clásicos a base de sílice es de 2 a 8. La elección del tampón suele estar determinada por el pH deseado. El pKa del tampón debe estar cerca del pH deseado, ya que el pH es más fácil de controlar en el pKa. La regla general es elegir un tampón con un valor de pKa <2 unidades del pH deseado de la fase móvil.

Valor de pHa y rango de tampón efectivo de diferentes tampones

Solución tampón	pKa（25℃）	Rango de pH efectivo
trifluoroacetato	0.5	<1.5
sulfonato	1.8	1-2.8
formato	3.8	2.8-4.8
Acetato	4.8	3.8-5.8
Fosfato	7.2	6.2-8.2
Amoníaco	9.2	8.2-10.2
Fosfato	12.3	11.3-1.3

Idea general de la aplicación de sal tampón

La concentración de la sal tampón es generalmente de 10 a 50 mmol/L. Seleccione la concentración de sal tampón de acuerdo con la naturaleza de la muestra y el volumen de inyección para que cumpla con la capacidad de amortiguación adecuada.
La relación máxima permisible de fase orgánica en la elución en gradiente debe determinarse de acuerdo con el experimento de miscibilidad de la sal tampón y la fase orgánica. Tome diferentes relaciones de fase orgánica de sal tampón para determinar el valor máximo permitido de la relación de fase orgánica, como sal tampón: fase orgánica en diferentes proporciones, como 10:90, 20:80, 30:70. No establezca arbitrariamente una alta proporción de fase orgánica en el instrumento para evitar que el instrumento se dañe por la precipitación de las sales tampón.
Seleccione la sal del tampón de acuerdo con múltiples restricciones, como la longitud de onda de corte, el valor de pH y la capacidad del tampón. Si la longitud de onda de detección absorbe al final, generalmente se debe seleccionar fosfato.
Las soluciones de sal tampón de uso común incluyen: solución de ácido fosfórico al 0,1 %/ácido trifluoroacético/ácido acético/ácido fórmico, solución de dihidrógeno fosfato de potasio de 0,02 a 0,05 mol/L (ajuste el pH a 3,0 con ácido fosfórico), etc.
El compuesto básico es preferiblemente sal de potasio, y el efecto de suprimir la cola es mejor.