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2025-03-14Efecto solvente
Cuando la proporción del disolvente y la fase móvil que inicia la fase orgánica es diferente, el efecto de detección será diferente en diferentes instrumentos.
La imagen muestra el efecto de detección del mismo proyecto en dos instrumentos diferentes. El disolvente para este proyecto fue 50% de acetonitrilo y la proporción inicial de la fase móvil fue 25% de acetonitrilo. La Figura 1 muestra el efecto en un instrumento con un diámetro interior mayor de la tubería previa a la columna, y la Figura 2 muestra el efecto en un instrumento con un diámetro interior más pequeño. El mayor diámetro interior del tubo permite que la muestra se mezcle completamente antes de ingresar a la columna, lo que elimina los efectos del solvente y presenta mejores formas de pico. Este tipo de proyecto con efecto solvente se puede resolver usando el instrumento con tubería más gruesa o reduciendo el volumen de inyección. Por supuesto, el método más seguro es reemplazar el disolvente de la muestra con una polaridad más cercana a la fase móvil inicial. solvente.
Efecto extracolumna
Si el volumen de inyección es demasiado grande, el volumen entre la válvula de inyección, la columna cromatográfica y el detector, la celda de detección y la junta será grande, lo que provocará efectos extracolumna y dará lugar a formas de pico anormales. Por lo tanto, para tales muestras, los requisitos del instrumento deberían estar más detallados en el método.
Cambios en la composición de la fase móvil.
La selección inadecuada del tampón, como concentraciones de sal del tampón que son demasiado bajas o están fuera del rango de pH eficaz del tampón, puede provocar una reproducibilidad deficiente. Para algunas muestras que son particularmente sensibles al pH, ligeros cambios en el pH de la fase móvil pueden dar lugar a resultados irreproducibles. Para tales muestras, se debe prestar especial atención al rango y la concentración del tampón al seleccionar el tampón para garantizar que el sistema de fase móvil pueda proporcionar un valor de pH estable para la detección de muestras.
Algunas muestras son particularmente sensibles a los cambios en la fase orgánica. Para estas muestras, se recomienda elegir la mezcla en línea de la fase móvil.
Las condiciones no controlan la temperatura de la columna.
Muchas muestras tendrán diferentes selectividades debido a los cambios en la temperatura de la columna. Por lo tanto, si no se controla la temperatura de la columna, se pueden producir problemas de reproducibilidad de la muestra debido al cambio de temperatura de la columna. Se recomienda verificar la durabilidad de la temperatura de la columna a una temperatura de ±10 °C durante el desarrollo del método. Si la temperatura de la columna es sensible a los cambios en la temperatura de la columna, la temperatura de la columna de detección debe incluirse en el método.
Además, problemas como el lento equilibrio de la columna, la sobrecarga de la columna y el fallo del instrumento también pueden hacer que el método sea irreproducible.
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Teoría del intercambio iónico
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