Poca durabilidad de los métodos de detección.

Efecto solvente

Cuando la proporción del solvente y la fase orgánica inicial de la fase móvil es diferente, el efecto de detección será diferente en diferentes instrumentos.

La imagen muestra el efecto de detección del mismo proyecto en dos instrumentos diferentes. El solvente para este proyecto fue 50% acetonitrilo, y la relación inicial de la fase móvil fue 25% acetonitrilo. La figura 1 muestra el efecto sobre un instrumento con un diámetro interior más grande de la tubería de precolumna, y la figura 2 muestra el efecto sobre un instrumento con un diámetro interior más pequeño. El diámetro interno más grande de la tubería permite que la muestra se mezcle completamente antes de ingresar a la columna, eliminando los efectos del solvente y presentando mejores formas de pico. Este tipo de proyecto con efecto solvente se puede resolver utilizando el instrumento con tubería más gruesa o reduciendo el volumen de inyección. Por supuesto, el método más seguro es reemplazar el solvente de la muestra con la polaridad más cercana a la fase móvil inicial. solvente.

Efecto extracolumna

Si el volumen de inyección es demasiado grande, el volumen entre la válvula de inyección-columna cromatográfica-detector, la celda de detección y la junta será grande, lo que provocará efectos extra-columna y conducirá a formas de pico anormales. Por lo tanto, para tales muestras, los requisitos del instrumento deben ser más detallados en el método.

Cambios en la composición de la fase móvil

La selección incorrecta del tampón, como las concentraciones de sal del tampón que son demasiado bajas o están fuera del rango de pH efectivo del tampón, puede resultar en una mala reproducibilidad. Para algunas muestras que son particularmente sensibles al pH, los ligeros cambios en el pH de la fase móvil pueden conducir a resultados no reproducibles. Para tales muestras, se debe prestar especial atención al rango y la concentración del tampón al seleccionar el tampón para garantizar que el sistema de fase móvil pueda proporcionar un valor de pH estable para la detección de la muestra.

Algunas muestras son particularmente sensibles a los cambios en la fase orgánica. Para estas muestras, se recomienda elegir la mezcla en línea de la fase móvil.

Las condiciones no controlan la temperatura de la columna

Muchas muestras tendrán diferentes selectividades debido a cambios en la temperatura de la columna. Por lo tanto, si no se controla la temperatura de la columna, puede generar problemas de reproducibilidad de la muestra debido al cambio de temperatura de la columna. Se recomienda verificar la durabilidad de la temperatura de la columna a una temperatura de ±10 °C durante el desarrollo del método. Si la temperatura de la columna es sensible a los cambios en la temperatura de la columna, la temperatura de la columna de detección debe incluirse en el método.

Otras preguntas

Además, problemas como el equilibrio lento de la columna, la sobrecarga de la columna y la falla del instrumento también pueden hacer que el método sea irreproducible.