Creo que muchas personas se han encontrado con una situación así. Después de un período de uso de la columna, la resolución de los picos cromatográficos adyacentes empeora y la forma del pico también se ensancha, o cuando se desarrolla el método, la resolución del compuesto objetivo no es buena. ¿Cuáles son las razones de esta situación? ¿Cómo solucionar problemas después de encontrar un problema? Discuta con usted hoy.

En cromatografía líquida, el grado de resolución (Rs) es la parte más importante de la separación cromatográfica. Independientemente de si el objetivo final de la cromatografía es el análisis cuantitativo y cualitativo o la preparación de muestras, se logra sobre la base de un cierto grado de resolución. La fórmula para calcular el grado de separación es la siguiente:

Entre ellos, Rs representa el grado de resolución, tR2 representa el tiempo de retención del pico siguiente en los picos adyacentes, tR1 representa el tiempo de retención del pico anterior en los picos adyacentes, y W1 y W2 son los anchos de pico W de los dos picos en la línea base.

¿Cuáles son las principales razones de la disminución de la resolución?

Se puede ver a partir de la fórmula de cálculo de la resolución que las razones más intuitivas para la disminución de la resolución son: la ampliación de la forma del pico, la extensión hacia adelante o hacia atrás y los cambios en el tiempo de retención. Por lo tanto, las principales razones de la disminución de la resolución son:

La columna se ha utilizado durante demasiado tiempo y la eficiencia de la columna ha disminuido
La columna o precolumna o el sistema está contaminado
La muestra está contaminada y deteriorada, lo que da como resultado un ensanchamiento de la forma del pico, colas o retrasos en el frente, o interferencia de picos espurios.
El volumen muerto fuera de la columna del instrumento es demasiado grande (la tubería es demasiado larga, el diámetro interior de la tubería es demasiado grande, el volumen de la celda de flujo del detector es demasiado grande, etc.), lo que provoca una disminución en la eficiencia de la columna y un ensanchamiento de la forma del pico
Influencia de la temperatura de la columna

El grado de separación es reducido, ¿cómo solucionarlo?

Si está en el experimento diario, si se reduce la resolución, primero verifique si la columna cromatográfica (incluida la columna de protección) está contaminada o no es válida, y límpiela o reemplácela. En segundo lugar, verifique el problema de contaminación de la muestra y vuelva a preparar la muestra. Realice el análisis. Finalmente, resuelva los problemas de contaminación del sistema y de la fase móvil, limpie los tubos del instrumento, reemplace los filtros en línea y cambie la fase móvil. Eliminando las posibilidades mencionadas anteriormente, el problema de la resolución reducida puede resolverse básicamente.

Si encuentra una baja resolución durante el desarrollo del método, hay muchos factores que influyen, como el tipo de columna, el tamaño de las partículas del material de relleno, el tipo y la proporción de la fase orgánica, el tipo y la concentración de la sal tampón, la temperatura y la longitud de la columna, etc. El impacto específico se discutirá con usted uno por uno más tarde.