Creo que muchas personas se han encontrado con una situación así. Después de un período de uso de la columna, la resolución de los picos cromatográficos adyacentes empeora y la forma del pico también se vuelve más ancha, o cuando se desarrolla el método, la resolución del compuesto objetivo no es buena. ¿Cuáles son las razones de esta situación? ¿Cómo solucionar problemas después de encontrar un problema? Discuta con usted hoy.

En cromatografía líquida, el grado de resolución (Rs) es la parte más importante de la separación cromatográfica. Independientemente de si el objetivo final de la cromatografía es el análisis cuantitativo y cualitativo o la preparación de muestras, se logra sobre la base de un cierto grado de resolución. La fórmula para calcular el grado de separación es la siguiente:

Entre ellos, Rs representa el grado de resolución, tR2 representa el tiempo de retención del siguiente pico en los picos adyacentes, tR1 representa el tiempo de retención del pico anterior en los picos adyacentes y W1 y W2 son los anchos de pico W de los dos. picos en la línea de base.

¿Cuáles son las principales razones de la disminución de la resolución?

Se puede ver en la fórmula de cálculo de la resolución que las razones más intuitivas para la disminución de la resolución son: ensanchamiento de la forma del pico, extensión de cola o hacia adelante y cambios en el tiempo de retención. Por tanto, las principales razones de la disminución de la resolución son:

La columna se ha utilizado durante demasiado tiempo y su eficiencia ha disminuido
La columna o precolumna o sistema está contaminado.
La muestra está contaminada y deteriorada, lo que da como resultado un ensanchamiento de la forma del pico, un retraso frontal o de cola, o interferencia de picos espurios.
El volumen muerto fuera de la columna del instrumento es demasiado grande (la tubería es demasiado larga, el diámetro interior de la tubería es demasiado grande, el volumen de la celda de flujo del detector es demasiado grande, etc.), lo que resulta en una disminución en la eficiencia de la columna. y una ampliación de la forma del pico
Influencia de la temperatura de la columna.

Se reduce el grado de separación, ¿cómo solucionarlo?

Si es en el experimento diario, si la resolución se reduce, primero verifique si la columna cromatográfica (incluida la columna de seguridad) está contaminada o no es válida, y límpiela o reemplácela. En segundo lugar, verifique el problema de contaminación de la muestra y vuelva a preparar la muestra. Realice el análisis. Finalmente, solucione problemas de contaminación del sistema y de la fase móvil, limpie los tubos del instrumento, reemplace los filtros en línea y cambie la fase móvil. Eliminando las posibilidades mencionadas anteriormente, se puede resolver básicamente el problema de la resolución reducida.

Si encuentra una baja resolución durante el desarrollo del método, hay muchos factores que influyen, como el tipo de columna, el tamaño de las partículas del material de relleno, el tipo y la proporción de la fase orgánica, el tipo y la concentración de la sal tampón, la temperatura y la longitud de la columna, etc. El impacto específico Se discutirá con usted uno por uno más tarde.